小芯片讓五種植物病毒快速“現形”

　　在15分鐘內可讀全部檢測結果，相較于傳統檢測一個病毒的十幾個小時，大大縮短了檢測時間，提高了檢測效率。

　　2010年12月21日，在北京檢驗檢疫局承擔的國家質檢總局科技計劃項目《植物病毒蛋白芯片檢測技術研究》專家驗收會上，項目組研發的可同時檢測香石竹斑駁病毒、黃瓜綠斑駁病毒、煙草脆裂病毒、百合無癥病毒和番茄斑萎病毒五種檢疫性植物病毒的五聯卡硝酸纖維素膜單抗檢測蛋白芯片，在15分鐘內即可讀全部檢測結果，相較于傳統檢測一個病毒的十幾個小時，大大縮短了檢測時間，提高了檢測效率。此科研成果引起了專家高度重視。

　　資料顯示，植物感染病毒后，對植物細胞的影響與動物病毒一樣，會打亂植物細胞的正常代謝活動，使植物的生長和發育遭到破壞，從而降低農作物的產量和品質。番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒、百合無癥病毒都能造成蔬菜、花卉等重要經濟作物的損失，其中番茄斑萎病毒、黃瓜綠斑駁病毒是重要外來檢疫對象，其余3種病毒由于其危害重大，在國內和各省區之間也列為重要防疫對象。據統計，每年由于病毒病的危害，全世界的糧食損失達200億美元。病毒通常造成退綠、矮化、畸形等癥狀。由于病毒是專性寄生物，至今仍缺乏具有選擇性的高效治療藥劑，使病毒病日益嚴重，成為當前農業生產中的一類重要病害。所以，在口岸檢測中起阻斷、隔離的植物檢疫就是最好的防治手段。

　　北京檢驗檢疫局《植物病毒蛋白芯片檢測技術研究》項目組研究制備了上述5種病毒的單克隆抗體細胞株的單克隆抗體和多克隆抗體，并擁有了自主知識產權。該項目組負責人北京檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心副主任汪萬春介紹，為方便使用，項目組同時研發了五聯卡硝酸纖維素膜單抗檢測蛋白芯片。相較于同類研究采用玻璃等基質制備芯片，硝酸纖維素膜基質的使用降低了制備工藝難度和應用對設備的依賴性；用硝酸纖維素膜為材料的蛋白芯片的基質；用金顆粒標記抗體；玻璃纖維素膜制備金標墊；檢測靈敏多克隆抗體作為標記抗體，單克隆抗體作為檢測抗體組裝芯片，相較于只用多克隆抗體作為檢測抗體，顯著地提高了檢測特異性；五種病毒同時檢測，檢測結果15分鐘內可讀，相較于傳統檢測一個病毒的十幾個小時，縮短了檢測時間，大大提高了檢測效率。

　　驗收會上，專家們審查了項目組提交的相關資料，聽取了項目組的工作報告和技術報告，并進行了質詢。參會專家對項目組的研究工作給予了充分的肯定。專家們一致認為：該項目試驗設計合理，方法科學，數據翔實，資料齊全，結果可靠，完成了計劃任務書規定的研究內容，達到國際先進水平，一致同意項目通過鑒定，并建議盡快推廣應用。

　　汪萬春還介紹說，該項目組根據研究成果申請了兩項國家發明專利；在《INDIANJOURNALOFVIROLOGY》發表SCI研究論文1篇；制定了《番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒、百合無癥病毒快速篩選檢測蛋白芯片法》行業標準1項，目前正在系統內征求意見。

　　目前，檢測植物病毒的方法主要采用進口抗血清檢測試劑盒進行酶聯免疫吸附測定（ELISA）以及用電鏡直接觀察組織中的病毒粒子。從已有報道看，目前國內外對血清學檢測方法均基于多抗血清而建立的，商品ELISA檢測試劑盒也多是多抗血清，然而多克隆抗體存在非特異性高、準確性和均質性差、產量有限等不足，難以滿足日益增長檢測需求；電鏡檢測需要昂貴的設備而不能普及應用。因而迫切需要建立快速、準確、簡便的檢測方法，為病毒病的診斷提供技術支持。為此，本項目利用五種病毒的抗原免疫小鼠和大白兔，制備了五種病毒的單、多克隆抗體，開展了檢測五種病毒的技術研究，開發了蛋白芯片，為五種病毒的田間檢測及進出口檢疫提供技術支撐和快速的檢測方法和產品。

來源：中國國門時報

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