藥明奧測LAG-3試劑盒開放與藥企合作伙伴進行CDx三類伴隨診斷共同開發

在PD-1/PD-L1靶點大火之后，面對擁擠的PD-1賽道，與PD-1同屬免疫檢查點的其它靶點，如LAG-3、TIGIT等也逐步走入了相關藥企和診斷企業的視線。今年3月，Relatlimab獲FDA批準，與抗PD-1藥物Nivolumab聯合，用于治療12歲以上不可切除或轉移性黑色素瘤的成人與兒童患者。隨著首款獲批LAG-3抗體的誕生，該靶點也受到了更為廣泛的關注。

在LAG-3檢測方法和伴隨診斷的開發中，一些重要的問題值得進行深入的討論，比如LAG-3究竟如何抑制T細胞？LAG-3藥物往往與PD-L1/PD-1藥物聯用或者開發雙抗，那么兩個靶點的分層分析以及伴隨診斷開發有什么特點？本文將在介紹LAG-3靶點的基礎上進一步就這些問題做一些探討。

01 LAG-3簡介和機制探討

LAG-3（淋巴細胞激活基因3）是一種細胞表面分子，對T細胞功能具有多種生物學效應，是藥企尋求開發腫瘤和自身免疫性疾病新療法的重要靶標。LAG-3 （CD223）蛋白屬于免疫球蛋白(Ig)超家族，是一種I型跨膜蛋白，具有四個細胞外Ig樣結構域，稱為D1至D4。LAG-3的胞外區與CD4具有約20%的氨基酸同源性。

LAG-3在活化的T細胞、NK細胞、B細胞和漿細胞樣樹突狀細胞等上表達。此外，據報道，LAG-3在神經元上也表達。

截至目前，主流觀點認為LAG-3的主要配體是MHC II，LAG-3與MHC II結合的親和力高于CD4。其它配體包括：FGL1及LSECtin等。LAG-3以與CTLA-4和PD-1類似的方式負調節T細胞的細胞增殖、活化和穩態。

LAG-3究竟如何抑制T細胞？研究人員們對LAG-3機制的探索從未停止。有研究者推測，LAG-3與MHC-II相互作用以阻止同一MHC分子與TCR和CD4結合，從而直接阻礙免疫反應中的TCR信號傳導。同時，該研究團隊也表示，LAG-3的確切信號轉導機制仍待進一步研究。此外，有研究者認為LAG-3可能并非通過CD4競爭性抑制的機制來抑制T細胞的活化，LAG-3選擇性結合穩定的pMHCII并抑制識別穩定pMHCII的CD4+ T細胞的活化。

今年4月，一篇發表于Nature Immunology的文章提示，在沒有MHC II結合的情況下，LAG-3與TCR–CD3復合物相關，通過驅動共受體Lck解離來抑制信號傳導，從而抑制T細胞的活性。

圖1：LAG-3與MHC II的相互作用

圖2：LAG-3選擇性結合穩定的pMHCII并抑制T細胞活化

02 國內外藥企布局靶向LAG-3的藥物

LAG-3已然成為了廣受藥企關注的免疫靶點，那么，各大藥企究竟在LAG-3靶點上發力幾何呢？在此，我們在下表中列出了LAG-3靶向療法的最新進展情況。

表1：LAG-3靶向藥物開發的最新進展

從上表可以看出，目前主要有LAG-3單抗、LAG-3雙特異性抗體、LAG-3融合蛋白這三類LAG-3相關藥物正在臨床開發中，具體每類藥物的臨床試驗藥物進展分析如下：

1 LAG-3單抗

LAG-3單抗主要通過靶向LAG-3，激活T細胞，從而激發人體的免疫系統。然而LAG-3單抗的研發之路充滿了坎坷。基于對臨床數據的評估，2021年，Immutep宣布授權合作伙伴GSK停止在活動性潰瘍性結腸炎患者中評價LAG-3單抗藥物GSK2831781（IMP731）的II期臨床試驗。由于LAG-3單抗單獨用藥在臨床拓展中仍存在一些挑戰，故而目前聯用其它免疫檢查點藥物如PD-1藥物是腫瘤免疫療法提高臨床療效的常見策略。

因此，已有PD-1藥物獲批的藥企，無疑在LAG-3靶點的單抗開發上占得先機。BMS最先著手研究LAG-3靶點，該公司開發的瑞拉利單抗(Relatlimab)與O藥的聯合用藥，已在臨床研究中證明了依從性和藥物不良反應弱于該藥企此前的Y藥+O藥的療法，療效上亦優于O藥單用。

今年年初，Relatlimab與Nivolumab聯合療法用于未經治療的晚期黑色素瘤的研究結果發布于新英格蘭醫學雜志。共有714名來自全球111個研究中心的晚期黑色素瘤患者參與了這項II/III期、雙盲、隨機臨床試驗，結果顯示，Relatlimab–Nivolumab聯合治療組的中位無進展生存期為10.1個月，而Nivolumab單藥治療組為4.6個月。在第12個月的隨訪時，Relatlimab–Nivolumab聯合治療組的無進展生存率為47.7%，Nivolumab組為36.0%。

臨床試驗結果提示，在既往未經治療的轉移性或不可切除的黑色素瘤患者中，與抗PD-1單藥治療相比，抗LAG-3和抗PD-1聯合治療顯示出更多的臨床獲益；同時，臨床結果也顯示，LAG-3高表達的患者對該藥的反應更佳。

圖3：Relatlimab–Nivolumab聯合治療組與Nivolumab組的無進展生存期

默沙東作為K藥的生產商，LAG-3單抗favezelimab與K藥聯合的療法在MSS CRC治療中的1期臨床結果評分優于標準療法，目前已開始3期臨床，有望成為下一個獲批上市的LAG-3靶點藥物。

此外，勃林格殷格翰公司的BI-754111聯合自家PD-1單抗和VEGF/Ang2雙抗的2期臨床試驗也已經啟動。再生元公司開發了一款新穎的Zr-89標記抗LAG-3的單克隆抗體REGN3767，可用于癌癥PET，也與自家的PD-1單抗組合進行了1期臨床試驗，試驗結果較好，已啟動了1/2期臨床。

諾華、GSK、Incyte等國際藥企也紛紛布局LAG-3靶點，均有單抗在研，目前大部分均與PD-1單抗聯合用藥，也有少數與TIM3等靶點聯合用藥，臨床試驗進展良好。

國內藥企亦不乏LAG-3單抗管線，恒瑞和信達均有一款LAG-3單抗在研，與自家研發的PD-1單抗聯合用藥的1/2期臨床進行中，目前安全性和耐受性良好。

百濟神州則與維立志博合作開發LBL-007，聯合了君實生物已上市的PD-1單抗進行聯合用藥，1/2期臨床試驗進行中。

2 LAG-3雙抗

在今年的LAG-3靶向藥物研發峰會（LAG3 Targeted Drug Development Summit）上，多個團隊的研究者表示相比單抗或聯合治療，PD-1/LAG-3雙特異性抗體或許更具優勢。

一些藥企選擇了直接開發共靶點的雙抗，代表公司是MacroGenics，該公司與再鼎醫藥合作研發的Tebotelimab是一款針對LAG-3/PD-1的雙抗。這是一款雙特異性四價的抗體，在抗體Fc區域增加了兩個靶向LAG-3的蛋白域，能夠同時驅動PD-1和LAG-3靶點下調，提供更持久的療效。前期有研究結果表明，LAG-3高表達的患者對Tebotelimab的反應良好。目前，該藥與MacroGenics公司的B7-H3單抗Enoblituzumab聯用的2期臨床研究正在國外開展。

岸邁生物基于專有的Fabs-In-Tandem免疫球蛋白技術，開發了一款同時靶向PD-1和LAG-3的雙克隆抗體，目前體外研究認為有明確的抗腫瘤活性，1/2期臨床研究已經完成首次給藥。

羅氏，F-star Therapeutics等國際藥企也擁有LAG-3和PD-1/PD-L1共靶點的雙抗的管線，羅氏選擇了與PD-1/TIM3雙抗RO-7121661聯用，F-star Therapeutics則選擇了單獨用藥，現在已經進行到了2期臨床。Xencor公司不走尋常路，開發了一款LAG-3和CTLA4共靶點的雙抗，目前與K藥聯用的1期臨床進行中。

3 LAG-3融合蛋白

除此之外，Immutep公司把目光投向了新穎的融合蛋白領域，開發了一款可溶性LAG-3融合蛋白IMP-321，IMP321屬于可溶性重組LAG-3，可激活樹突狀細胞，誘導T細胞增殖。體外研究證明可用以誘導癌癥患者對腫瘤持續發生免疫反應。該藥與K藥和紫杉醇的聯用在2期臨床試驗中獲得了積極的中期數據。

TACTI-003研究，即一項研究可溶性LAG-3融合蛋白Eftilagimod Alpha（IMP321）與Pembrolizumab聯合治療不可切除的復發性或轉移性頭頸部鱗狀細胞癌的多中心、開放標簽、隨機、II期臨床試驗正在招募中（NCT04811027）。

圖4：IMP321作用機制（Immutep公開資料）

根據目前全球進入臨床階段的LAG-3療法公開信息分析（具體如下圖所示）：整體看來，目前LAG-3靶點臨床研究很多，其中8款處于1期臨床試驗階段，13款進入2期（包括1/2期）臨床試驗，1款進入3期臨床試驗，1款已上市；LAG-3的藥物類型目前以單抗類藥物為主；與PD-1/PD-L1靶點的聯用或共用最為常見，也有少數臨床研究是與其它靶點比如TIM-3，CTLA-4聯合。

圖5：全球進入臨床階段的LAG-3療法公開信息分析

隨著第一款藥物的上市，LAG-3靶點已成功證明了自身價值，作為新興的藍海市場，未來發展可期。在PD-1/PD-L1市場已接近飽和的局面下，無論國外老牌藥企還是國內創新藥企，都需要在新的免疫檢查點上尋求突破。LAG-3目前進入臨床階段的15款單抗、7款雙抗和1款融合蛋白，正在期待臨床數據的驗證。無論最終哪家藥企能在LAG-3靶點上獲得突破，都是腫瘤患者的福音。

03 LAG-3用于分層分析以雙靶點 伴隨診斷開發策略

在LAG-3相關療法中，LAG-3表達檢測對療效評估具有非常重要的意義。在Relatlimab與Nivolumab聯合治療晚期黑色素瘤一文中，如下圖所示，在兩個治療組中，LAG-3表達≥1%的患者組中位無進展生存期估計值更長。結果提示，LAG-3檢測將有助于實現更好的患者分層，實現精準醫療。

圖6：LAG-3表達分組的無進展生存期

實際上，這個臨床試驗里面對PD-L1和LAG3這兩個靶點都進行分層分析，如果把數據綜合來看，一方面觀察不同亞組的差異，另一方面觀察亞組內部雙藥與單藥的差異，我們可以看到雙靶點療法的一些特點。

下圖的表格匯總了不同的分層亞組PFS中位數的差異，我們可以看到不管是LAG-3陽性還是PD-L1陽性，相比陰性患者，不論雙藥還是單藥PFS都顯著延長；另一個角度，如果比較聯用和單藥的效果差異，我們可以觀察到PD-L1陽性的亞組里面，雙藥和單藥的差異其實相對不明顯。

圖7：LAG-3/PD-L1表達，采用單藥/聯合用藥的患者PFS比較

施貴寶Relatlimab藥物的研究實現了所有用藥人群達到了臨床終點，因此目前并沒有LAG-3伴隨診斷試劑盒的申報。但隨著類似臨床研究的涌現，我們會越來越多的遇到雙靶點甚至多靶點用于患者篩選或者患者分層分析的情況，那么相應的伴隨診斷開發也就會成為一個很關鍵的問題。

是否兩個靶點都需要考慮申報伴隨診斷？兩個靶點申報伴隨診斷時是否需要闡明相關關系？目前由于還沒有實際申報的案例，我們可以從邏輯上做一些探討，在總體上進行把握。有兩個靶點的時候，我們可以用這個模型來考慮伴隨診斷策略：

圖8 ：雙靶點伴隨診斷策略框架

當然，這里沒有探討可以輔助用藥決策的補充診斷，以及一個藥物和相關伴隨診斷已經上市 vs 兩個靶點都沒有上市等情況。在具體項目中甚至有可能涉及兩家診斷企業甚至兩個藥企，實際上會遇到更復雜的情形。但萬變不離其宗，最終監管需要的還是高質量的伴隨診斷試劑盒以及它與藥效的關聯，抓住了這兩個線索，那么就可以用清晰的邏輯和證據來向監管機構闡明雙靶點伴隨診斷的申報策略。

04 LAG-3檢測方法和抗體選擇

根據文獻報道，LAG-3選擇性表達在活化的T淋巴細胞、自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）和樹突狀細胞。與Elisa、WB等蛋白檢測方法相比，免疫組化更能對于LAG-3的蛋白表達進行定性和定位，因此目前免疫組化在LAG-3的檢測中較為常見。

而在免疫組化中，為了得到特異性染色，獲得可靠結論，抗體的選擇是至關重要的一環。據不完全統計，目前全球共有1053種LAG-3抗體，用于IHC（免疫組化）、Elisa、WB、FC等蛋白檢測方法。

在IHC應用中，17B4為最常用的抗體克隆號，17B4識別人 LAG-3 的第一個 N 端 D1 結構域的 30 個氨基酸外環，此環參與了LAG-3和配體MHCII之間的結合，這也是LAG-3區別于CD4的主要結構[2]。自20世紀90年代起，該克隆被廣泛應用于LAG-3表達的檢測。此外，D2G4O、EPR20261等克隆也均有不錯的表現。藥明奧測LAG-3靶點覆蓋主流克隆，可為藥企提供個性化定制。

05 藥明奧測LAG-3抗體RUO試劑盒

目前藥明奧測已成功開發LAG-3抗體RUO試劑盒，特異性識別LAG-3靶點，定位準確，靈敏度高。該試劑盒在開發過程中，在宮頸癌、肝細胞癌、結腸腺癌、尿路上皮癌、黑色素瘤等癌種上均進行了抗體特異性檢測（圖12），并由病理醫生閱片，證明該試劑盒在不同癌種上的染色結果均能符合其特性。除手工版外，還配備機載版試劑盒，用于免疫組化染色機的批量樣本檢測。

藥明奧測LAG-3試劑盒開放與藥企合作伙伴進行CDx三類伴隨診斷共同開發，歡迎各藥企合作伙伴垂詢。

圖9：LAG-3抗體試劑盒染色結果40x（藥明奧測內部數據）

轉自：搜狐網

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